高效液相色譜儀的優缺點及其對流動相的要求

高效液相色譜儀也叫高壓液相色譜、高速液相色譜、高分離度液相色譜等，它是在經典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。

 

高效液相色譜儀的優缺點：

 

優點：分離效率高，選擇性好，檢測靈敏度高，操作自動化，應用范圍廣；

 

與氣相色譜法相比具有的優點：不受試樣的揮發性和熱穩定性限制，應用范圍廣；流動相種類多，可通過流動相的優化達到高的分離效率；一般在啊室溫下分析即可，不需高柱溫。

 

缺點：分析成本高，液相色譜儀價格及日常維護費用貴，分析時間一般比氣相長。

 

高效液相色譜對流動相的要求有哪些？

 

1、純度：流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45um或更細的膜過濾)。溶劑所含雜質在柱上積累，會影響色譜柱的使用壽命。

 

2、溶解度：樣品的溶解度要適宜如果溶解度，如果溶解度欠佳樣品會在柱頭沉淀，不但影響純化分離，還會縮短柱子的使用壽命。

 

3、粘度要低(應<2cp) 高粘度溶劑會影響溶質的擴散、傳質，降低柱效，還會使柱壓降增加，使分離時間延長。*選擇沸點在100℃以下的流動相。

 

4、樣品易于回收。應選用揮發性溶劑。

 

5、流動相：PH采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時，通過調節流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術稱為反相離子抑制技術。對于弱酸，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當pH值遠遠小于弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在;對弱堿，情況相反。分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時，通常在流動相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。